關(guān)于ELISA試劑盒的固相載體原理
更新時(shí)間：2014-08-28 點(diǎn)擊次數(shù)：3355次
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好，空缺值低。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較結(jié)果。可作ELISA中載體的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。其長(zhǎng)處是表面積極大，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行，其速率與液相反應(yīng)近似。
在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過(guò)程中動(dòng)彈淋洗，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。ELISA試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌利便，試劑盒一般均配以特殊儀器。
為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附機(jī)能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附機(jī)能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空缺值較大。也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA試劑盒固相載體的。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附機(jī)能比聚苯乙烯高，但空缺值也略高。聚苯乙烯ELISA板因?yàn)樵系牟煌椭谱鞴に嚨牟顒e，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其機(jī)能。
ELISA載體的外形主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，不介入化學(xué)反應(yīng)。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積，標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的進(jìn)步。ELISA試劑盒現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對(duì)操縱的尺度化極為有利。
